• Каталог
• Биохимия
• Реагенты и контрольные материалы
• Иммуно-турбидиметрические Реагенты
• Общая информация

Иммунотурбидиметрия – высокоточное определение специфических белков, имеющих высокую диагностическую значимость.

Изменение концентрации индивидуальных белков сыворотки крови, спиномозговой жидкости и мочи происходит как при физиологических, так и при патологических изменениях в организме. Мони­торинг изменения концентрации индивидуальных белков имеет как диагностическое значение, так и прогности­ческое при лечении ряда патологий. Одним из методов применяемых в лабораторных ис­следованиях при клинической оценке воспалительного процесса является иммунотурбидиметрия.

Иммунотурбидиметрия – это количественное измерение концентрации специфических белков по изменению мутности раствора при реакции антиген–антитело. Этот метод характеризуется доста­точно высокой чувствительностью, которую можно повысить за счет использования латексных час­тиц, легким внедрением в рабочий процесс лабораторий за счет простоты и скорости проведения анализов и легкой адаптацией к большинству полуавтоматических и автоматических биохимических анализаторов.

Для иммунотурбидиметрии необходимо построение калибровочного графика с использованием нескольких концентраций калибратора, так как калибровочный график имеет нелинейный характер.

Как построить калибровочный график для иммунотурбидиметрии? 

Кривая доза–эффект

Реакция антиген–антитело проявляется в растворе в виде образования агрегатов. Схематически взаи­модействие антигенов с антителами можно представить так:

• Если титровать сыворотку, содержащую специфические антитела, соответствующим анти­генам, то на первом этапе при невысокой концентрации антигена все его молекулы будут свя­заны с антителами. Величина преципитатов увеличивается по мере добавления антигенов, в супернатанте при этом сохраняются свободные антитела. Такое состояние называется "избытком антител".
• при дальнейшем титровании сыворотки наступает состояние, когда концентрация антигенов и антител будет соответствовать другу другу – произойдет взаимное связывание всех антител и всех антигенов. Такой комплекс выпадает в осадок (преципитат), а в супернатанте антитела и антигены отсутствуют (не определяются). Такое состояние определяют как "эквивалентное".
• Продолжение титрования сыворотки антигеном ведет к избытку антигенов. При этом частицы иммунных комплексов становятся мелкими, преципитат практически не образуется. Такое сос­тояние носит название "избытка антигенов".

Все эти переходы титрования сыворотки, содержащей специфические антитела к соответствую­щим антигеном, описываются кривой "доза-эффект", которая соответственно состоит из трех зон:

1. Зона избытка антител.
2. Зона соответствия антигена и антитела.
3. Зона избытка антигенов – прозона.

 

 

Для иммунотурбидиметрических измерений необходимо, чтобы они проводились в зоне избытка антител. Только этот восходящий участок кривой доза-эффект используется в качестве калибровочного графика. Иное будет неправильным!

Калибровочная кривая строится:

• для каждого индивидуального белка,
• для каждого прибора,
• при любом изменении условий регистрации и
• периодически по мере проведения исследований.

 

Калибровочный график для иммунотурбидиметрического определения специфических белков

Для построения графика обычно требуется 3–5 стандартных растворов антигена (определяемого белка). В настоящее время используются калибраторы (стандарты) с разным уровнем концентрации аналита, определенного точным (лучше референсным) методом. Для каждой концентрации согласно методике определения проводят три параллельных исследования, в которых определяют оптическую плотность в каждой калибровочной пробе.

При серийных исследованиях в стандартных условиях допускается корректировка графика на основании измерения одного из стандартов. Это основано на том, что характерный вид стандартной кривой не меняется из-за влияния систематических факторов, а происходит параллельный сдвиг всего графика. В этих случаях производят пересчет графика, так, чтобы он шел параллельно первич­ной кривой, но проходил бы через новую точку.

Прозона

Обычно состав реакционной смеси подбирается фирмами производителями так, чтобы измере­ния проводилась в зоне избытка антител. Однако при очень высокой концентрации белка в образце антител для образования иммунного комплекса не хватает (избыток антигена). В этом случае части­цы преципитата становятся мелкими, определение попадает в нисходящую часть кривой доза-эф­фект – прозону. При этом, несмотря на увеличение концентрации белка, сигнал прибора уменьшается, что приводит к получению неправильного результата (вместо высокой концентрации – низкая концентрация белка). Чтобы этого избежать следует развести образец. Если при этом сигнал прибора увеличивается, это свидетельствует о том, что определение проводилось в прозоне и допущена ошибка. Разведение проводят до такой концентрации белка, чтобы она располагалась в зоне избытка антител. Полученный при конечном разведении результат умножают на степень разведения.

Обычно в инструкции по применению наборов указывается до какой максимальной концентрации антигена в образце эффект прозоны отсутствует.

В автоматических биохимических анализаторах при турбидиметрическом способе регистрации предусмотрена функция проверки прозоны.

Компания ДИАКОН предлагает широкий спектр реагентов для количественного определения специфических белков методом иммунотурбидиметрии, а также калибраторы и контроли производства компаний DiaSys, Германия и APTEC Diagnostics, Бельгия

Версия для печати